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关于细胞冻存液冻存与复苏的操作守则

更新时间:2017-11-07 点击次数:1502
上一篇我们讲到了细胞冻存液的使用注意事项,今天呢细胞冻存液厂家小编就给大家带来细胞冻存液的冻存与复苏的操作方法
细胞冻存液的冻存和复苏操作步骤:
细胞冻存和复苏采取“慢冻快融”的原则,慢速冷冻可使细胞内的水份渗出细胞外,减少细胞内形成冰晶的机会,快融以保证细胞外结晶快速融化,避免慢速融化水份渗入细胞内,再次形成胞内冰晶造成对细胞的损伤。
(一)细胞冻存液细胞冻存
配制含10%DMSO或甘油的细胞冻存液,4℃预冷(新鲜配制的冻存液会产生大量的热);
取对数生长期的细胞,用细胞消化酶将单层生长的细胞消化下来;悬浮细胞则直接将细胞收集到离心管中;
离心1200rpm,6 min;
去除上清液,逐渐加入适量预冷的细胞冻存液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中的细胞终浓度为5×10e6/ml~1×10e7/ml;
将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5ml;
在冻存管上标明细胞的名称、冻存时间及操作人员姓名;
冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;到达-80℃时,则可迅速放入液氮中。
(二)细胞冻存液细胞复苏
佩戴眼镜和手套,从液氮中取出冻存的细胞管。
迅速放入38℃水浴中,并不时摇动,在1分钟内使其*融化,然后在无菌条件下取出细胞。
1200rpm/min离心5-10min,弃去上清,加入适量培养液混匀后接种于培养瓶中,次日更换一次培养液
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