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浅析细胞冻存液冻存的过程

更新时间:2017-12-22 点击次数:1033
细胞冻存液首先关键在于冷冻保护剂,一般常用DMSO此类渗透性保护剂,一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份的DMSO混合而成,现配现用或配置后放入普通冰箱冰盒内冷冻保存,使用前于室温水浴融化。关键在于DMSO的终浓度为10%,对于普通细胞来说,小牛血清浓度似乎高点越好,但没有这个必要,用细胞培养液即可。
细胞冻存
1.预先配制冻存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;
2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);
3.再次用*培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化*的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀。
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过*,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐。
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