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Lonza支原体检测试剂盒的操作步骤

更新时间:2018-04-09 点击次数:2461
对于Lonza支原体检测试剂盒的操作使用,小编发现许多人都还不是很了解该如何正确的操作,今天呢小编就给大家讲一下Lonza支原体检测试剂盒的详细操作步骤吧
Lonza支原体检测试剂盒操作步骤: 
贴壁细胞:1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中,接种密度为1-2×104。同时,接种正常无支原体感染的同种细胞,作为阴性对照。2.5天后,先吸去培养液,再加入1ml的固定液,静置20min,3.吸去固定液,晾干。4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15-20min或室温静置20~30min。5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml灭菌超纯水洗涤三次,直接风干。风干后加入一滴封片液,并以盖玻片覆盖。6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
悬浮细胞:1.收集需检测的细胞,1500rpm,5min。2.将收集的细胞涂片于载玻片上,再加1ml的固定液,静置20min。3.吸去固定液,晾干。4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞),37℃避光放置15~20min或室温静置20~30min。5.吸去Hoechst 33258工作液,用无菌水洗涤玻片3次,直接风干。风干后加入一滴封固液,并以盖玻片覆盖。6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发,观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。结果判断(参考):阴性:仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。阳性:除细胞外,细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。
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