胶原酶是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的,主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬,内含较多结缔组织或胶原成分时,用胰蛋白酶解离细胞的效果较差,这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织,可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为*终浓度200U/ml(约为1mg/mL)或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶,要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
关于胶原酶的配制和保存:
1.配制的缓冲液:胶原酶应该用氏液来配。不能用三蒸水因为渗透压太低细胞不能耐受,也不能用培养液因为其中的成分复杂对消化有影响,*也不用氏液因为Ca2+Mg2+离子易与一些成分结合形成沉淀影响分离(但这是理论上,我曾经试过结果也还不错),PBS文献上没见过,但应该理论上可以用的
2.配制的方法:
书上是36.5摄氏度搅拌溶解2h;4摄氏度过夜;0.22um过滤除菌;
但网上有人的方法是:室温下直接溶,好溶,溶完直接0.22um过滤除菌,据说也可行;
3.配制的浓度:1mg/ml、0.1-0.5%、0.025%(不同组织采用不同浓度)
4.配置后保存方法:
有的人推荐现用现配;
4度存放,*1~2周内用完;
长时间贮存宜在-20摄氏度,用前可放37度溶解,但溶解时间不能过久,防止酶活性受影响;
5.消化组织时间:取决于消化液浓度和组织类型,一般消化时间为2-3小时或者4度过夜
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