间充质干细胞（MSC）如何培养与鉴定？

相比于胚胎干细胞或神经干细胞，MSC具有易获取、易体外培养、传代稳定性、低免疫原性等优势，在体外经过多次传代后仍具有多向分化和自我复制的潜能，且MSCs多来自于成年的组织，研究过程的道德和伦理学问题较小。

MSC的大小与形状具有异质性，即不同种属或不同组织的MSC具有不同的生长形态，例如三极形、长梭形、小圆形、短梭形和扁平形态。几乎所有的MSC都是贴壁生长，具有较强的贴壁能力，而MSC的原代分离也正是利用了MSC强贴壁的特性。例如，骨髓MSC的分离方法为：将从组织中分离出来的单个核细胞悬浮培养于含有FBS的培养基中，1~2天后去除非贴壁细胞，保留贴壁细胞再培养2-3周即可获得。此外也可采用免疫磁珠对MSC进行分选，但这种方法成本较高。

对于MSC的鉴定，常采用的方式包括形态学鉴定，表面标志物鉴定和多系分化潜能鉴定。MSC一般呈纤维细胞样生长，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵圆形核，胞质向外伸出2-3厘米长短不同的突起。MSC的细胞表面标志物则常采用流式细胞仪进行鉴定，不同组织来源的MSCs可共享相同的细胞表面标记，如CD29和CD44。但目前我们对MSC表面分子标志物的研究还不完善，已发现的表面标志物也存在特异性不强的问题，为了让我们更好地分离、培养和鉴定MSC，需进一步不断发现新的特异性标志物。

                                         常见的方法 

茜素红染色（成骨诱导）

茜素红S(AlizarinRedS)钙染色法是一种旨在通过鳌和技术，使钙离子和茜素红S产生复合物，来分析固定处理的细胞样本中橘红色钙沉积现象的经典的技术方法。主要适用于动物原生代或培养细胞的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。操作简捷，性能稳定，显色清晰。

Oil Red O（油红O）染色（成脂诱导）

作为脂肪细胞的染色剂的原理是使用Oil Red O 的油溶性，对其它的细胞结构着色性差。成脂肪诱导的过程中，细胞在胞浆中不断有油滴的累积，并不断的增加变大，后整个细胞的胞浆中都是油滴。Oil Red O染色的方法是对油滴的染色的一种方法。

成软骨诱导（试剂盒）

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