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淋巴细胞分离液分离白细胞方法步骤
更新时间：2021-05-24 点击次数：1790
淋巴细胞分离液是一种用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异，通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。接下来为您介绍下淋巴细胞分离液分离白细胞方法步骤。
提供一个常规的方法供参考：
首先，需要注意的是在分离前使分离液恢复至室温，离心时也应保持室温，因为此条件下分离液的密度为标注密度。
1. 新鲜血（肝素抗凝20u/ml）＋1640（无血清）培养液或PBS按照1：1 稀释；
2. 在15ml或50ml塑料离心管中预先加入淋巴细胞分离液，使分离液：稀释后血液=1:1；
3.小心的将稀释后的血液加到分离液的上面；
4. 室温 2600rpm 离心20分钟；
5. 取出离心管，小心吸出白白的那一层，重悬于5倍体积的不*培养液或PBS中，混匀；
6.室温 1500rpm 离心5分钟；
7.吸弃上清，再加4ml不*培养液，混匀；
8.室温 1000rpm离心5分钟；
9.弃上清，用*培养液稀释至2ml；
10.淋巴细胞记数；
11.按所需浓度及实验目的稀释细胞，种板。
淋巴细胞分离液可用于体外分离外周淋巴血细胞，也可以从其他来源中分离单核细胞，包括脐带血细胞和骨髓细胞，适用于从血液及组织匀浆中分离所需细胞，在医疗和医学生物中广泛应用。其他人及动物多种比重细胞分离液。
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