对于细胞培养而言,血清的重要性显而易见。它含有包括生长因子在内的蛋白、氨基酸、脂类、碳水化合物、维生素及其他组分,可以促进贴壁或悬浮细胞的生长和维持。胎牛血清(FBS)是细胞培养常用的血清。
什么是胎牛血清?
胎牛血清是指怀孕5-8个月的母牛被屠宰后,发育未*的胎牛心脏穿刺采血获得。此时胎牛血中含有特殊的生长发育因子,一旦胚胎发育*这些因子自动消失。
何为内毒素?它的作用是什么?
内毒素(Endotoxin)是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的*成分。细菌在生存状态时释放不出来,只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时,才表现其毒性。内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。内毒素直接参与细胞凋亡,血清中内毒素含量越低,对细胞毒性越小,越利于细胞的生长和传代;内毒素含量过高,会直接导致细胞提前老化。因此,血清应进行内毒素水平检测。国际上规定,胎牛血清的级别应以内毒素水平的高低来确定,其中,特级胎牛血清的内毒素应<10EU/ml。
胎牛血清的成分有下面几大类:
1.蛋白质类
包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促进细胞附着)、转铁蛋白(能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用)、纤维粘连素(促进细胞附着生长)等;
2多肽类
主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子,最主要的生长因子是血小板生长因子,还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,虽然在血清中含量很少,但对细胞的生长和分裂也起着重要作用;
3.激素类
激素对细胞的作用是多方面的。包括:胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关;类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用:促生长激素:促进细胞增殖的效应;氢化可的松:血清中含有微量该成分,它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明,血清中的氢化可的松,在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。
4.其他成分
如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培养基中这些成分的作用并不明显,与蛋白相结合的微量元素对细胞生长起促进作用。