细胞是构成人体结构和功能的最基本单位,人体就是由大量的不同类型的细胞组成的,在不同的组织器官,含有不同的细胞,分别具有不同的结构,执行不同的功能。比如血液中有三种血细胞,分别是红细胞白细胞和血小板,红细胞具有运输氧气和二氧化碳的功能,白细胞在人体的免疫功能中发挥着重要作用,血小板是人体负责止血的血细胞。另外,人体还有多种其他类型的细胞,分别执行着不同的功能。 怎样避免细胞污染:
1.实验进行前,超净台用紫外灯照射30-60min,然后用75%酒精擦拭超净台台面,并开启超净台风机运转5-10min再开始实验操作。
2.实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内;实验用品用完应移出超净台,以利于空气的流通;实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。
3.每次操作只处理一种细胞;即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基,避免细胞间的交叉污染。
4.操作时小心取用无菌的物品,避免污染。勿碰触吸管尖头,不小心碰触后应立即更换;不要在打开的容器瓶口正上方操作,容器打开后,倾斜45°操作,操作完成后及时盖上瓶盖。
5.CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方,应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次,用双蒸水清洗,再用酒精棉球擦拭一遍,最后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水(应每周更换),待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。
6.定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。
注意事项:
1、 DMSO配制的时候会放热,一定要等冻存液冷却后使用,避免灼伤细胞;
2、 细胞离心后尽量吸干净上清液,减少培养基残留,避免稀释冻存液;
3、 不建议手动梯度降温,温度不稳定,容易降低存活率;
4、 注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于低刻度线;冻存5次后异丙醇需要更换一次,以免影响冻存效果;程序降温盒需恢复到室温以后才能继续使用,不能从冰箱拿出来直接使用;
5、 细胞悬液加入冻存液以后尽量短时间的在常温放置,DMSO常温下对细胞损伤大,分装完成后立即转入程序降温盒放到-80度冰箱,不需要放4度;
6、 -80度冻存过夜后可以转入液氮长期保存,转入液氮的过程需要对冻存盒进行保冷,不要长时间在常温暴露,避免冻存管融化;
7、 若没有液氮罐,存放在-80度的时候一定要放靠里面的位置,避免开关冰箱导致温度不稳定。
8、 细胞冻存后应取出一管复苏,检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存,为稳妥起见可在细