我们建议在临床ELISA试剂盒测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，ELISA试剂盒很少有人注意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容易造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。
曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题，就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间，ELISA试剂盒在做HBsAg测定的室内质控中，ELISA试剂盒测定由卫生部临床检验中心供应的1ng/ml弱阳性样本时，总是测不出来，不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。
因此，为保证37℃下足够的温育时间，临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃，从而适当延长板条在温箱中的放置时间。用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。ELISA试剂盒作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原*结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。
