红细胞裂解液使用方法
更新时间:2014-05-06 点击次数:6178
使用说明:
对于组织细胞样品:
1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2. 加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。
3. 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不*,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤:
1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2. 对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均可。
3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。
4. 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
5. 如果发现红细胞裂解不*,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明:对于常规步骤,多一步洗涤过程中的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好
一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。
对于血液样品:
1. 取新鲜抗凝血,400-500g离心5分钟,离心弃上清。
2. 加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解1-2分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4-5分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
3. 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不*,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
注意:对于微量或少量的血液样品,可以在*步中不进行离心弃上清的操作,直接在第二步中加
入10倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或4℃裂解4-5分钟。对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。
对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤:
1. 每1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作均可。注意:对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
2. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,混匀。
3. 400-500g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不*,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明:对于常规步骤,多一步洗涤过程的离心,但可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更一些,同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心,但洗涤效果略差一些,同时需要大体积的