羊水细胞培养基的制备方式
更新时间：2014-09-22 点击次数：2284
一、羊水细胞培养基常规培养法
1、采样：选择妊娠13-14周妇女，在无菌条件下抽取羊水5ml，立即注入无菌离心管中。
2、收集：离心分离细胞，1000rpm10分钟，去上清，留0.5ml，轻打混匀。
3、接种：将混匀的羊水细胞种置于50ml或100ml细胞培养瓶内，平均10ml羊水细胞收集的细胞种置一瓶加5-10ml混合培养液。
4、培养：酒精灯火先封口，静置培养48小时后观察细胞贴臂及生长情况，5-10天后可见瓶底面有大量羊水细胞生长。
5、终止培养：当有大量圆形发亮细胞出现时，加秋水仙素0.02-0.04ug/ml，作用10-12小时。
6、细胞收集：将培养液倒入一干净离心管中，加0.025%的胰蛋白酶0.5-1ml/瓶，轻轻摇动，使培养瓶底面*接触消化酶，然后用弯头吸管吹打，待细胞全部脱落后加前培养液终止胰蛋白酶消化。用吸管移细胞悬液于离心管中。1000-2000rpm10分钟，弃上清，留细胞沉虑。若一次消化不*，可反复消化。
7、低渗及预固定：加预温37℃KCL溶液10ml，37℃温育30分钟，加0.5-1ml新鲜配制的3∶1甲醇冰乙酸固定液预固定，用气泡吹打细胞使其混匀。
8、固定：用新鲜配制的3∶2甲冰固定三次，每次30分钟。固定液加入时沿管壁缓慢加入。
9、制片及干燥：用绒毛制片。
10、分带处理。
二、羊水细胞培养基盖玻片培养法
1、采样：选择妊娠13-14周妇女，在无菌条件下抽取羊水5ml，立即注入无菌离心管中。
2、收集：离心分离细胞，1000rpm10分钟，去上清，留0.5ml，轻打混匀。
3、接种：30mm培养皿中放盖玻片1张，每片滴混匀的细胞液1-2滴，置培养箱内培养30-60分钟。
4、培养：取出后从盖玻片外加培养液2ml，静置培养48小时后观察细胞生殖状况并定时换液，5-10天后，可见大量成纤维细胞或上皮样细胞生长。
5、终止培养：当有大量圆形发亮细胞出现时，加秋水仙素0.02-0.04ug/ml，作用10-12小时。
6、低渗：倒掉培养液，加预温37℃0.075MKCL溶液5ml，37℃温育30分钟，镜下可见胀大的羊水细胞，加0.5-1ml 3∶1甲醇：冰醋酸固定液预固定。
7、固定：倒掉低渗液，加5ml固定液固定30分钟以上，反复3次。
8、干燥：将附有细胞的盖玻片斜放于培养皿中，置80℃烤箱处理2-3小时。
9、胶片：将附有细胞的盖玻片用树脂胶封固于玻片上，正面朝外，小心细胞破坏。
