造血干细胞培养基配制

    人造血干细胞作为成体干细胞的重要组成，尤其在胚胎干细胞定向诱导分化为造血干细胞的机理、CD34和CD45等表面标志分子成功筛选、培养条件的优化探索中取得了突破性进展，这为治疗恶性血液疾病、根本缓解血细胞来源紧张等临床应用提供了可能。本文就人类胚胎干细胞向造血干细胞方向分化的研究进展作如下综述，以期为致力于该研究领域工作的科研人员提供一些有益的参考。
    人体大部分骨头的中央部门有骨腔,骨腔内所含的物质即骨髓.骨髓中有一种能起着造血功能的细胞就叫造血干细胞.人血中的红细胞,血小板,淋巴细胞,粒细胞等,都是由它经过多次分化发育而成的.
    造血干细胞( hematopoietic stem cell，HSC) 具有高度的自我更新和多向分化潜能，是组织特异性干细胞研究中zui为活跃和成熟的研究方向，也是组织特异性干细胞转分化研究的发源地和核心，已经成为目前研究zui为深入的成体干细胞，在世界范围内得到了广泛应用。
    造血干细胞培养基配制
    一、配制用水
    培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。
    二、培养基
    培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。
    三、血清
    培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。
    四、抗菌素
    为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。
    五、植物血凝素（PHA）
    非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。
    经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。
    PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。