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细胞冻存解决方案

更新时间:2015-12-08 点击次数:2982
 细胞冻存解决方案
细胞冻存步骤
1.预先配制冻存液:10 % DMSO + 90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷; 2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,PBS冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和); 3.再次用*培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化*的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀。 4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。 5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐。

解决方案
1.冻存液:A:dmso 推荐 sigma (货号D2650-100ml) B:胎牛血清根据自己习惯 1.DMSO 不用高压灭菌;DMEM不能高压 灭菌 2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存.. 3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(体积比) 2.胰酶(hyclone 货号 sh30042.01) pbs (hyclone 货号sh30256.01b) 培养瓶,离心管 推荐coring 或者 falcon 枪头 推荐axygen (axygen枪头已经基本国产化) 3.冻存管 推荐axygen的彩色冻存管,有各种颜色的盖子,方便分类。且性价比较高。目前市场上nunc 和corning的一次性冻存管使用也很广泛,但如果量大不如axygen冻存管划算。现在还提供底部印有二维码的方便识别的冻存管。 4.冻存盒:推荐使用biologix的纸质冻存盒,标注清晰,书写后不容易掉色,且有各种颜色可选。同时也 有塑料冻存盒供使用。质量高,价格低。 5.程序降温盒:推荐 nalgene(货号 5100-0001)。使用zui广,*的程序降温盒。 6.液氮罐:根据需求,1000个样本的储存空间,推荐金凤的yds-50b-125,含6个6层25孔方提桶,保 护罩及一只真空安全帽,含不锈钢盒,zui多放900只样本。 7.另外还有冷冻记号笔,不锈钢冻存盒架,细胞滤网,冻存管支架等等。

液氮罐使用注意事项:
1. 容器的使用维护:充液氮前要用少量的液氮预冷;补充液氮的时机是液氮剩余量为总容量的1/3为宜; 严禁在容器盖上放置物体和密封瓶口;严防敲击碰撞。 2. 不能用其他塞子代替罐盖,更不能密封塞子,以免液氮蒸发,压力增高,损伤容器;检查容器液 面高度时,应用塑料小棒或实心小木棒插入底部,过5-10s后取出,结霜的长度即为液面高度。

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