深度说明细胞培养基的总结、定制
CMRL-1066
CMRL-1066于20世纪50年代由 Connaught 医学研究实验室在M199的基础上经过大量改进而成,其特点为其成分以化学试剂为主,属于非蛋白质添加型培养基。zui初用来培养L系(Lstrain)细胞,曾经在无蛋白质添加的条件下连续培养单层细胞达数年。尽管该培养基开发目的为细胞提供无血清培养之需,但在有血清添加的条件下该培养基可用于支持多种细胞的生长。
DMEM-Ham's F12 50:50 Mixture
DMEM-Ham's F12为研究人员开发用于无血清细胞培养之需。取代培养基中的血清添加,该培养基添加有混合营养成分,生长因子和激素。Mather和Sato曾报道添加有胰岛素(insulin),转铁蛋白(transferrin),(表皮生长因子(epidermal growth factor),促黄体素(luteinizing hormone,LH)或者促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH),类胰岛素生长因子(somatomedin)和生长激素的无血清培养基成功培养了Leydig细胞和Sertoli细胞。尽管针对不同的细胞使用激素的含量不同,1:1比例混合的DMEM和Ham’s F-12对多数细胞比较适宜。15mM的HEPES常用来为该培养基提供酸碱缓冲体系,补偿无血清添加造成的培养基
缓冲能力不足。
Leibovitz's L-15 Medium
IscoveL-15 (Leibovitz) 培养基zui初开发用于非二氧化碳依赖型细胞生长环境(该环境需要碳酸氢钠)。L-15 缓冲体系由盐类、碱性氨基酸、和替代glucose的替代物galactose维持。L-15支持HEp-2、LLC-MK2以及原代胚胎和成人组织的体外培养。多种病毒在此培养基中也成功得以包装。
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)是在Basal Medium Eagle(BME)基础上改进而来。其中氨基酸浓度为BME的4倍,根据葡萄糖(glucose)的浓度高低分为“高糖(4500mg/L)”和“低糖(1000mg/L)”两类,相对BME,DMEM含有多种添加成分。DMEM首见于小鼠胚胎细胞培养,其后各种改进型广泛用于原代细胞,非转化和转化细胞的培养。各种DMEM的区别主要在于L-谷氨酰胺(L-glutamine),丙酮酸钠(Sodium Pyruvate)的不同组合以及是否含有酚红(Phenol red)等。
Iscove's Modification of DMEM
Iscove等人的研究表明红细胞和巨噬细胞的前体细胞(precursor cell)能够在*无血清的培养基中生长,该培养基需要辅以albumin,transferrin,lecithin以及 selenium。 IMDM是在DMEM的基础上进行了改进,加入selenium,氨基酸和维生素,sodium pyruvate,HEPES,以及potassium nitrate取代DMEM中的ferric nitrate。进一步研究表明IMEM支持鼠B淋巴细胞、骨髓中的造血组织(hemopoietic tissue)、lipopolysaccharide刺激的B细胞、T淋巴细胞及
多种杂交瘤细胞等的生长。
McCoy's (Iwakata & Grace Modification)
1959, McCoy等报道了体外培养Novikoff Hepatoma细胞所需的氨基酸。他们在基本培养基的基础上通过调整加入氨基酸的量产生了MCCOY'S 的配方。随后Hsu 和Kellogg 使用这种培养基成功培养了一系列来源于多种组织的原代细胞,这些组织包括正常骨髓(bone marrow)、皮肤(skin)、牙龈(gingiva)、睾丸(testes)、小鼠肾脏(mouse kidney)、网膜(omentum)、肾上腺(adrenal glands)、肺(lung)、脾脏(spleen)、大鼠胚胎(ratembryos)及其它组织。
MCDB 131
MCDB 系列培养基是由Ham等人在20世纪70到80年代开发使用的,可以满足细胞在一定激素、生长因子和微量元素或者低量透析血清条件下生长。 MCDB 131zui初用来培养人微血管内皮细胞(HMVEC)的克隆生长,还广泛用于肝细胞、平滑肌细胞、心肌细胞及其它细胞类型的无血清条件培养。
Medium 199
早期开发的细胞培养基主要成分来源于动物或者组织抽提物,上个世纪50年代Morgan和同事报道了他们的成果,使用*由合成营养元素制备的培养基培养细胞。他们在实验中将维生素、氨基酸和其它因子按照不同方式配比,zui终得到维持体外组织培养的培养基M199。然而他们发现细胞的长期培养需要在培养基中添加动物血清。通过调整适宜浓度的添加物,M199有着广泛的用途,尤其非转化细胞的培养。M199通常用于病毒学研究,疫苗生产以及体外培养原代小鼠胰腺上皮和大鼠感光组织。
Minimum Essential Medium (MEM)
Minimum Essential Medium (MEM) 由Harry Eagle于上个世纪50年代开发的培养基工艺,是zui常用的细胞培养基之一,早期应用于正常哺乳动物成纤维细胞和特定HeLa细胞亚系的培养。相对于Eagle’s Basal Medium (BME),MEM中添加了细胞必需的营养成分,随后的研究显示这些添加的营养成分对大多快速增殖的细胞有促进作用。MEM含有较高水平的氨基酸,接近于培养的哺乳动物细胞的组分。MEM广泛用于支持单层细胞的生长,选择性添加非必需氨基酸和Hank’s/Earle’s盐更进一步扩大了MEM的使用范围。另外降低培养基中钙离子含量适用于悬
浮细胞的培养。MEM的alpha改进型(alpha-MEM)含有Earle’s平衡盐、非必需氨基酸和丙酮酸钠,并且相对于BME提高了维生素含量。该配方由Stanners等在1971年首先用于培养小鼠和仓鼠的杂交瘤细胞。
Basal Medium
由Harry Eagle 于1962年开发,Eagle's 基本培养基(或称为BME)为广泛应用合成培养基之一。加入适当的添加剂后可以用来支持包括正常细胞以及转化细胞的单层细胞增殖。该培养基的开发是基于20世纪50年代的几项研究成果,当时这种基本培养基被用来确定细胞生长必要的营养成分。BME是Eagle’s Minimum Essential Medium (MEM)和Dulbecco’s Modified Eagle’sMedium (DME) 的前身,可用来培养二倍体或者原代哺乳动物细胞。
RPMI 1640
RPMI-1640是Moore等人在上个世纪60年代开发的,名字RPMI由他们当时工作的研究所名称的字头缩写组成(Roswell Park Memorial Institute)。培养基组分是在他们先前开发的RPMI-1630的基础上改变了氨基酸和维生素的含量,缓冲体系仍然采用碳酸氢盐(bicarbonate)系统。RPMI-1640曾被用来培养人正常或者异常增生的白细胞。通过添加不同的成分,RPMI-1640广泛用于支持许多种细胞的生长和增殖,为zui常用的细胞培养基之一。
Nutrient Mixtures (Ham's)
Ham's复合营养基zui初开发用于支持CHO、HeLa和L-细胞生长,F-12还用于培养原代大鼠肝细胞和前列腺上皮细胞增值。Ham's F-10 用于培养人二倍体细胞,用于染色体分析的白血细胞和大鼠、兔以及鸡原代组织培养。根据培养细胞的类型,Ham's复合营养基可以单独使用或者添加一定浓度的血清。通常液体培养基由碳酸氢钠提供缓冲,细胞培养于5%CO2环境中;另外25mM的HEPES添加对培养基pH值有稳定作用。F12K为F-12的Kaighn's改进型,区别在于提高了氨基酸和丙酮酸的含量,主要用来培养分化的大鼠和鸡细胞以及原代人肝细胞的生长。