Roche 高效DNA地高辛标记和检测试剂盒I 产品介绍: 高效地高辛(DIG)标记探针可应用于RNA杂交,DNA杂交,点杂交分析等,同时也可用于克隆和噬菌斑杂交。试剂盒使用DIG-11-dUTP(碱不稳 定性)随机引物标记DNA模板并对DIG标记杂交物进行显色检测。试剂盒备有结合储存液NBT/ BCIP,现有的封闭液和DIG易杂交颗粒。高效DIG混合物包含稳定Klenow enzyme(克列诺酶),核苷酸,引物和反应缓冲液。
Roche 高效DNA地高辛标记和检测试剂盒I 检测原理: 高效DNA地高辛标记检测试剂盒I是用地高辛(Digoxigenin,简称DIG;又称异羟基洋地黄毒甙元,是一种类固醇半抗原分子)标记的DNA探针,应用于分子杂交和随后的显色反应检测。罗氏公司的该试剂盒检测主要分三阶段进行:1)DNA标记 :根据随机引物标记技术,生成DIG地高辛标记的DNA探针。2)杂交 :按照标准杂交方法进行,将地高辛标记的DNA探针用于核酸点杂交,可选择带正电的尼龙膜或纯硝酸纤维素膜作为杂交膜。 3)免疫学检测 :首先将标记有AP的地高辛抗体与杂交探针免疫结合;通过检测碱性磷酸酶与NBT/BCIP底物进行显色反应的数值,从而达到免疫检测的目的。
灵敏度和特异性: 标准检测使用1µg线状pBR328。通常需要0.8µg标记DNA(标记1小时后)和 2.3µg标记DNA(20小时反应后)。在点杂交过程中,16小时显色后(探针浓度20ng/ml)可以检测到0.1pg同源DNA。DNA印迹中,加 载1µg消化胎盘DNA可检测到单拷贝基因(tPA)。 地高辛引物标记优点: 质粒、柯斯质粒和λ噬菌体DNA均可作为模板,模板DNA(线状或超螺旋)标记10ng-3µg引物都具有同样的标记效率。
产品组成成份: • DIG-High Prime, 5x conc., 50 µl • DIG-labeled Control DNA, 20 µl, (5 µg/ml) pBR328 (linearized with Bam HI) • DNA Dilution Buffer, 3 x 1 ml • Anti-digoxigenin-AP Conjugate, 100 µl • NBT/BCIP Stock Solution, conc., 6 x 1 ml • Blocking Solution, 10x conc., 4 x 100 ml • DIG Easy Hyb Granules, 4 x 100 ml
Roche作为zui大的生物技术公司,罗氏在抗肿瘤、抗病毒、炎症、代谢和中枢神经系统等领域拥有*的差异化药物。罗氏在体外诊断和基于组 织的肿瘤诊断市场中享有,同时也是糖尿病管理领域的者。Roche公司生产的DIG标记DNA检测试剂盒在DNA、RNA和核酸点杂交等实验 应用中有出色表现,特别是第二代试剂盒使用CSPD化学发光检测具有更高的准确度和灵敏性。
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