Cygnus F410 E.coli HCP ELISA Kit 大肠杆菌宿主细胞蛋白免疫检测试剂盒

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产品英文名称：E.coli HCP ELISA Kit
产品中文名称：大肠杆菌宿主细胞ELISA检测试剂盒

E.coli HCP ELISA试剂盒 产品介绍：
E.coli HCP试剂盒主要设计用于检测产物重组表达过程中大肠杆菌宿主细胞污染，试剂盒使用的多克隆抗体对数百种HCPs具有反应性。检测zui低浓度可达到 0.2ng/mL。
ELISA检测相比Western Blot：Western Blots检测过程复杂并需借助程序分析结果。而且，Western Blot本质上是定性分析，不能得到定量结果，检测灵敏性也受到样本体积的限制。Western Blot在下游纯化过程中检测产物HCPs缺乏灵敏度和特异性。而微量滴定板ELISA检测可以克服上述限制。ELISA具备高度灵敏性，可获得半定量结果，是纯化工艺，过程控制，常规质量检测的*选择。

§检测原理：大肠杆菌E. coli检测是一个双位点酶联免疫检测。样本中包含的E. coli HCPs蛋白与标记有抗-CHO抗体的辣根过氧化物酶同时反应，反应发生在之前涂有一层吸附性抗-CHO蛋白抗体的微量滴定板中进行。免疫反构成为夹层式结构：固相抗休-HCP-酶标记抗体。反应结束后清洗微量滴定板去除未结合反应物。添加TMB作用底物反应。微量滴定板读数器上测定水解物浓度，水解物浓度与CHO HCPs蛋白浓度成比例。用提供的标准液绘制标准曲线，根据读数可以计算出E. coli HCPs蛋白含量。

§检测过程：取出所有试剂平衡到室温→分别移取25µl标准液，对照物和样品至待测孔→移取100µl anti-E. coli:HRP（#F411）至每孔→密封滴定板，摇床室温温育90分钟，180rpm→清空小孔，用纸吸干残留液，350µl清洗缓冲液清洗4次→加100µl TMB 作用物（#F005）→室温静置30分钟，不需摇床→加100µl反应终止液（#F006）→分光光度计450/650nm读数

§结果分析：标准液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）可用于制作标准曲线，标准液浓度相当于免疫反应HCP总浓度。根据测定的小孔中标准液吸光值绘制标准曲线。数据分析可以使用计算机选配曲线，例如点到点，三次样本函数，或四参数逻辑曲线。不要使用线性回归分析修改样品吸光值，这样会出现显著误差。也可以手工绘图，Y轴标注吸光值，X轴标注浓度，然后用光滑曲线连接各点。然后根据样品吸光值计算出样品中HCP浓度。（操作时每一浓度标准液都要滴定到两个小孔中，以便计算平均分光光度值，样品也需计算平均吸光值）。 

CHO HCP ELISA组成成份：
● Anti- E. coli:HRP（辣根过氧化物酶标记）            1x12mL   F411（Product#）
● Anti- E. coli coated微量滴定板                        12x8孔  F412
● E. coli HCP标准液（0, 1, 3, 12, 40, 100ng/mL）     1mL/瓶 F413
● Stop Solution终止液（0.5M硫磺酸）             1x12mL F006
● TMB （3,3’,5,5’-四甲基联苯氨）                          1x12mL F005
● Wash Concentrate清洗物（20倍浓缩）                1x50mL   F004 

E.coli HCP ELISA kit英文简述：
This kit was developed using broadly reactive polyclonal antibodies to the hundreds of different HCPs and is intended for use in determining the presence of E.coli host cell protein contamination in products manufactured by recombinant expression. Our assay validation has determined that the LOD for this kit is ~0.2ng/mL.

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