BeYaMATM 1 订购信息
JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium
BeYaMATM 1
COMPONENT
VOLUME
STORAGE
500mL Complete Medium (货号: HJ0101M )
BeYaMATM 1 Basal Medium(货号: HJ0102M)
400mL
Store at 2~ 8℃
BeYaMATM 1 5X Supplement(货号: HJ0103M)
100mL
Store at -20℃
BeYaMATM 1
JuviTM Human iPSC/ESC Growth Medium
人多能干细胞无血清培养液*实验操作手册
4 ℃溶解 Matrigel ( BD 354277 )6小时,轻摇混匀。请注意:原液应是均质粘稠的半流体状态,要避免温度过高,否则 Matrigel 会变成凝胶状态。 冰上预冷 1.5ml 离心管和移液器枪头,冰上快速将 Matrigel 分装成 350-500ul/ 支,储存于 -80 ℃,用前置于 4 ℃解冻。 将溶解的 Matrigel 加入 25ml 预冷的无血清 DMEM/F12 培养基中,轻轻混匀,避免产生气泡。 将稀释的 Matrigel 加入六孔板中, 1ml/ 孔,轻摇培养板,使 Matrigel 均匀铺在培养板底部。 Parafilm 封好包被的培养板,至于 4 ℃储存,用前置于 37 ℃培养箱中孵育至少 1 小时。 在 4 ℃解冻 BeYaMATM 1 5X Supplement (货号: HJ0103M) 添加剂,加入 BeYaMATM 1 Basal Medium (货号: HJ0102M) 基础培养基中,形成 500mL BeYaMATM 1 Complete Medium (货号: HJ0101M )*培养基。 BeYaMATM 1 *培养基可在4 ℃稳定储存2 周。可按实际用量将BeYaMATM 1 *培养基分装后置于-80 或-20 ℃保存,避免反复冻融。复苏 hESCs/hiPSCs 前,复温 Matrigel 包被的培养板,吸弃孔内液体,加入 2ml BeYaMATM 1 *培养液及 2ul 5uM/L Rock Inhibitor Y27632 ,用以促进细胞贴壁。 从液氮罐中取出 hESCs/hiPSCs 冻存管,浸入 37 ℃水浴,轻轻摇晃,直到细胞融化至仅剩一小块冰晶,迅速取出并用 75% 酒精擦拭冻存管外表面,转移至无菌超净台中。 将细胞悬液接种至准备好的培养板中,轻轻晃动使细胞均匀分布在板底。 小心将培养板放置于培养箱中,避免振动。 30-90min 后显微镜下观察细胞基本贴壁,更换新鲜 BeYaMATM 1 *培养液,之后每 24h 换液, 4-6 天后传代。 提前准备好 Matrigel ( BD 354277 )包被过的六孔板,吸弃孔内包被液,加入 2ml BeYaMATM 1 *培养液。 吸弃待传代 hESCs/hiPSCs 孔内的培养液,并用 1ml 无钙镁的 PBS 洗 1 遍。 加入 0.5ml Accutase 细胞分离液使之*覆盖皿底。 室温孵育 5-8 分钟或 37 ℃孵育 3-5 分钟,显微镜下观察到大部分克隆细胞间出现间隙,细胞表面发亮但尚未相互分离时,可吸去 Accutase 。 可将培养板放置 37 ℃继续孵育 1min, 或者直接加入适量新鲜 BeYaMATM 1 *培养液,轻轻摇晃,干细胞集落基本脱落。亦可用细胞刮刀将剩余克隆轻轻刮下,尽量避免用枪头反复吹打细胞。 将制备好的细胞悬液按 1 : 3 - 1 : 6 的比例接种至准备好的培养板中,注意细胞过密则克隆边界不圆滑,易分化,细胞过稀则克隆存活率降低。 轻轻摇晃培养板让细胞均匀分散,置于 37 ℃, 5% CO2 培养箱中培养6小时。 每天更换培养液,待细胞密度达到 80% 以上,或者克隆中央密度过大,影响细胞生长时进行传代。
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