illumina MiSeq基因测序试剂盒v3 150循环

产品名称：MiSeq Reagent Kit v3 (150 cycles)基因测序试剂盒

产品货号：MS-102-3001

产品说明：

大输出: 15 Gb（600个循环数），3.8 Gb（150个循环数）

大Read: 多达2500万

核酸类型: RNA, DNA

试剂类型: 双端测序, 簇生成, 边合成边测序

技术: 测序

系统兼容性:研究模式下的MiSeqDx, 研究模式下的MiSeq FGx, MiSeq, MiSeq

产品介绍：

MiSeq试剂盒v3的通量在所有MiSeq试剂盒中居*。这款v3试剂盒保留了与v1和v2试剂盒相同的即用型预装试剂盒，通过改良试剂，可提高簇密度和片段长度，并提高质量(Q)分值。

借助MiSeq试剂盒v3，研究人员可：

• 使单次运行的输出翻倍

• 使用600次循环试剂盒，使片段长度长延伸至2 x 300碱基对

• 将片段数量增至2500万个，以开创新的应用

更新系统软件后，可释放v3试剂盒的全部功能。

MiSeq v3试剂盒可使每个流动槽的输出量翻倍。该试剂盒以600次循环格式提供，在任何Illumina测序系统上均可生成长片段长度。该试剂盒还提供150次循环格式，该格式支持计数应用。此外，我们将继续供应所有MiSeq试剂盒v2配置。MiSeq试剂组件采用RFID编码，并可巧妙地与MiSeq系统交互，以验证与用户定义的应用之间的兼容性。

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Illumina二代测序技术，边合成边测序（SBS），是广泛采用的新一代测序（NGS）技术，负责产生世界上90％以上的测序数据。

Illumina的二代测序技术称为边合成边测序(Sequencing-by-Synthesis,简称SBS)。SBS主要包括碱基延伸、荧光激发及信号收集、剪切等3个步骤。这3个步骤可以重复，循环进行。每循环一次测定一个碱基。想测定多少个碱基（即读长），就循环多少次。测序循环次数可以在软件里设定。到底测序多长合适，要根据项目性质和需求来决定。大多数情况下，SR实验（单端测序）测定1x50个碱基，PE实验（双端测序）测定2x150个碱基。

1 碱基延伸

Illumina测序试剂里所使用的dNTP特色，它们同时具有两个修饰基团：一个荧光基团，一个可逆终止基团。A、G、C、T 4种碱基分别标记4种不同的荧光基团，它们在不同波长的激光激发下，能够发射不同波长（即颜色）的荧光。荧光颜色与碱基种类一一对应，因此根据激发光的波长可以识别碱基。4种碱基的终止基团是一样的。由于终止基团的存在，所有dNTP每次都只能延伸1个碱基，无论给予多长的反应时间。又由于该终止基团是可逆的，在荧光信号收集完毕之后，可以用剪切剂切除该终止基团，使碱基恢复自然的可延伸状态，这时即可继续进行下一轮循环，再测定一个碱基。

可逆终止基团技术是Illumina二代测序的一大特色。它与桥式PCR技术一起，构成了Illumina二代测序的两大支柱，为稳定获得高质量的测序数据打下了坚实的基础。

2 信号采集

HiSeq系列测序仪具有红绿两根激光管，两个滤色片。它们两两组合，可以形成4种不同的激发波长，正好分别用于激发A、G、C、T 4种碱基。

Cluster上所标记的荧光基团在激光激发下产生的信号，可以用相机拍摄或者扫描的方式收集信号。扫描技术速度比较快，被X10系列采用。由于FC面积比较大，而且上表面和下表面要分别拍照，所以拍照过程相当耗时。对于经典的HiSeq 2000来说，一次测序循环所产生的荧光信号，需要大约40分钟的时间才能拍照收集完毕，时间比测序反应本身还要长。

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